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PCR原理 PCR分类 引物设计方法详解剖析

大家好,今天来为大家分享pcr引物加多了怎么办的一些知识点,和引物二聚体解决办法的问题解析,大家要是都明白,那么可以忽略,如果不太清楚的话可以看看本篇文章,相信很大概率可以解决您的问题,接下来我们就一起来看看吧!

本文目录

  1. pcr扩增产生大量引物二聚体的原因
  2. 二聚体杂质产生机制
  3. 低温可以形成引物二聚体吗
  4. pcr引物加多了怎么办

pcr扩增产生大量引物二聚体的原因

如果没有杂带,只是目的条带不亮,就不是特异性问题,而是扩增效率较低。可能是引物结合不好,或者两个引物退火温度差异过大等原因。可以先试一试降低退火温度,增加循环数。提高模板浓度,或回收后再次扩增也可以试一试。如果要求不是很高,这样优化一下就差不多了。

二聚体杂质产生机制

是引物的3'端间相互错配扩增形成的。引物二聚体的出现是必然的,只是或多或少的问题,电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现,只是含量低我们的肉眼看不到而已。

提高PCR严谨性(包括提高退火温度,降低引物浓度等)可大大降低二聚体的浓度。

低温可以形成引物二聚体吗

低温可以防止出现引物二聚体的,在PCR时等到机子运行了,升到95摄氏度的时候再把样品加到PCR仪里,那样也能降低引物二聚体的形成

同向相同的引物对未形成二聚体,反向相同引物对测试Ct值是30.5.低温预处理的短寡核苷酸促进二聚体形成,而在热启动PCR反应中无作用

pcr引物加多了怎么办

1.最好的办法就是重新设计引物,一般来说引物之间存在大量的碱基互补配对就会容易形成引物二聚体。推荐使用Primer5进行引物设计,软件里会清晰的显示引物二聚体形成的情况。

2.如果不想重新设计引物,可以考虑提高退火温度试一试,较高的退火温度会大大降低引物二聚体的形成。

3.减少引物的使用量,建议把加入引物的量减少一半试试,一般PCR体系里引物是过量的,减少引物的量对PCR反应影响不大,但是能一定程度上降低引物二聚体,毕竟引物少了,两对引物间两两结合的概率也就低了。

文章分享结束,pcr引物加多了怎么办和引物二聚体解决办法的答案你都知道了吗?欢迎再次光临本站哦!

手把手教你设计PCR引物 基础篇

标签:# 加多# 引物# 怎么办# pcr